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平博app超低温保藏菌种的方法

作者:平博app下载平博app罐 来源:原创 日期:2014-12-22 8:09:03 人气:1081 加入收藏 标签:平博app 平博app超低温

   平博app超低温保藏就是将菌种密封在有保护剂的安瓿管内,经控制速度冻结后,在-150℃~-196℃液态氮超低温罐中保藏。

   1.菌种制备

   保藏孢子时,取孢子制成悬液,加入保护剂,装入无菌安瓿管内。保存菌丝体时,用液体振荡法培养菌丝球,或用平板培养菌丝体,也可用麦粒菌种。取适量放入无菌的装有保护剂的安瓿管内。

   2.安瓿管

   制作安瓿管的玻璃,要具有经受温度突变而不破裂、容易用火焰熔封管口、恢复培养时容易打开的特点。一般采用硼硅玻璃,管的大小根据需要而定,通常是75毫米×10毫米或能容1.2毫升液体的安瓿瓶比较合适。选好安瓿管后,每管加进0.8毫米保护剂,塞上棉塞,在1千克/平方厘米压力下灭菌15分钟,供冻结琼脂菌丝片或麦粒菌种用。如冻结孢子悬液时,则空管灭菌。

   3.保护剂

   用体积比10%甘油蒸馏水溶液或10%二甲亚砜蒸馏水溶液作保护剂。

   4.冻结保藏

   将上述准备好的菌种以无菌操作移入加有保护剂的安瓿管中,用火焰将安瓿管上部熔封,浸在水中检查有无漏气。然后将封口的安瓿管放在慢速冻结器内,控制冻结速度,一般每一分钟降低1℃,使样品逐步均匀地冻结到-40℃。-40℃以下的冻结速度,可不用控制而迅速下降。安瓿管冻结后,立即放入平博app罐中。罐内的气相温度为-150℃,液体温度为-196℃。

   5.恢复培养

   需要平博体育app保藏菌种时,将安瓿管从平博app罐中取出,立即放入33~40℃的水浴中振荡至管内冻结物全部融解,开启安瓿管,将管内菌种接入适宜培养基培养即可。

   平博app超低温保藏是目前长期保藏菌种的最好的一种方法,用它进行保藏各类食用菌的菌种都获得了满意的结果。

   目前常用的平博app罐的容积有10升、35升两种,也有更大的,如美国菌种保藏委员会(ATCC)平博体育app的容积达250升和650升。常用的备用平博app罐容积为10~35升,也有100升的。由于平博app来源困难、平博app罐设备费用大,目前这种保藏方法还未广泛普及平博体育app。可以了解更多关于平博app超低温保存原理

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